Esta é um desafio! Se alguém me responder ganha 10 pontos!?
É sobre o processo de extração do DNA. O processo eu conheço, mas não consigo encontrar nada para ler e estudar sobre cada passo da extração do dna. Se alguém puder me explicar para que serve cada passo eu ficaria grata!
1. Centrifugar o sangue a 300 rpm por 5 min.
2. Pipetar 500 microlitros de células da camada leucocitária para um tubo de 2 ml.
3. adicionar 900 microlitros de solução de lise de hemácias.
4. Agitar gentilmente por inversão por 10 min
5. Centrifugar a 13000 rpm por 4 min
6. Descartar o sobrenadante
7. repetir os passos 3 a 6
8. Adicionar 600 microlitros de solução de lise de leucócitos
9. Ressuspender o pellet e encubar em banho 55 °C por 30 min
10. Adicionar 200 microlitros de solução de precipitação de proteínas
11. Vortexar de 20 seg a 1 min at´q que ocorra a precipitação
12. Centrifugar a 13000 rpm por 10 min
13. passar o sobrenadante para outro tubo de 2 ml e descartar o pellet
14. Adicionar ao material 1200 microlitros de isopropanol
15. Agitar gentilmente até a formação da nuvem de DNA
16. Centrifugar 13000 rpm por 10 min e descartar o sobrenadante
17. Adicionar 500 microlitros de etanol 70% sem ressuspender o pellet e descartar o álcool
18. deixar o dna secar e adicionar 300 microlitros de água
Gente, é para um trabalho de Genética da Universidade. Obrigada!
Comments
Puxa!
=\
Até o passo 9 é fácil porque tudo gira em torno da purificação da amostra pra chegar ao DNA.
Então tem centrifugação pra separar os componentes do sangue, lise das hemácias que não são necessárias pois não têm DNA, as lavagens que são pra retirar todo vestígio de hemácia, e depois a lise dos leucócitos e assim ter o DNA suspenso na amostra.
Mas depois eu não sei o que acontece ao certo. Não posso te ajudar!
=\
Boa sorte no trabalho.
Abraço.
=D
Extração de DNA a partir de Bife de FÃgado: O objetivo desta atividade está em extrair DNA a partir de um pedaço de bife de fÃgado! à importante saber os seguintes conceitos:
O DNA está no núcleo da célula
As membranas celulares são formadas por uma dupla camada lipÃdica
Enzimas são catalisadores que aceleram as reações quÃmicas
Nesta atividade as células serão lisadas, liberando todo o conteúdo celular. O DNA será separado da mistura contendo as organelas e proteÃnas e poderá se observado a olho nu. Nós aconselhamos que esta atividade seja realizada previamente de modo que alguns parâmetros (tais como tamanho do bife de fÃgado e a quantidade de sal adicionada) sejam otimizados. Deste modo, realize esta atividade pelo menos uma vez com diferentes quantidades destes "materiais" antes de realizá-lo para valiação.
Material Necessário:
-Um bife de fÃgado de aproximadamente 300 gr
-Liqüidificador doméstico
-Sal
-Detergente de lavar louça transparente
-Ãgua morna
-Copos de vidro transparente
-Palitos
-Ãlcool (isopropanol)
-Um coador
-Procedimento
Corte o bife em pequenos pedaços
Coloque no liqüidificador
Adicione água morna com sal (aproximadamente 5 pitadas)
Bata por uns 10 segundos
Passe a mistura para um copo através do coador. Encha mais ou menos metade do copo Misture no copo, lentamente para não fazer bolhas, 2 a 3 colheres de chá de detergente
Lentamente adicione o isopropanol no copo até encher. Não misture o álcool com a solução, deixe o álcool permanecer como um camada isolada no topo da solução
Espere uns 5 minutos
O DNA deverá surgir na superfÃcie da solução. Pesque o DNA com um palito!
Sugestão de questões a serem realizadas:
Qual a função do sal?
Resp: O sal proporciona um ambiente favorável para o processo de extração pois contribui com Ãons positivos (NA+) que neutralizam a carga negativa do DNA;
O que o liqüidificador faz?
Resp: O liqüidificador ajuda a quebrar mecanicamente as membranas da célula
O que acontece quando se adiciona o detergente?
Resp: As enzimas presentes no detergente desestruturam as moléculas de lipÃdios presentes nas membranas celulares
Qual o papel do álcool?
Resp: O DNA é insolúvel em álcool e deste modo se separa da solução. O DNA tem também menor densidade que os outros constituintes celulares, por isso surge na superfÃcie da solução
Por que você não pode ver a dupla hélice?
Resp: A estrutura de dupla hélice só pode ser visualizada de modo indireto e através de aparelhos sofisticados. O que você está observando são milhares de fitas de DNA juntas
Espero ter ajudado!!!
não Sei. 8D